来自山东师范大学济南分校的研究小组,中国建立了一种检测尿酸- dna糖基化酶的高度灵敏和无标记的方法,一种从DNA分子中去除尿嘧啶的DNA修复酶。尿嘧啶是一种RNA碱基,当尿嘧啶通过胞嘧啶的脱氨作用出现在DNA中或者在DNA合成过程中误传,这个错误可能会导致突变。
尿嘧啶DNA糖基化酶活性降低与许多疾病状态有关,包括人类免疫缺陷和布鲁姆综合征。一种遗传性疾病,与癌症风险增加有关(除其他症状外)。开发敏感的方法来量化尿酸- dna糖基化酶,将有助于早期诊断此类疾病,并提高对dna修复机制的理解。作为概念的证明,研究人员发现,这种方法可以定量HeLa癌细胞裂解液中的酶。
他们的方法让我想起了Rube Goldberg机器,通过一系列相连的,机械的步骤。一个步骤的完成触发了另一个步骤的开始:例如一行多米诺骨牌落下砸在大理石上,反过来,滚下轨道。在这项工作中,一种酶的作用返回的产物是另一种酶的首选底物。冒着稍微偏离的危险,在OkGo的音乐视频中,我们可以看到Rube Goldberg机器的一个更为壮观的例子,那就是“这也是应该通过的”,仓库大小的机器的一次拍摄,以滚动汽车,摆动钢琴,流动的水和滚动的台球,所有这些都是为了执行(扰流器警报)的任务,即用彩色油漆对乐队成员进行面部爆破。
作者的策略包括使用7种不同的酶和3种核酸探针进行一系列连续的步骤。首先是一个含有一个游离尿嘧啶碱基的双链DNA探针:尿嘧啶DNA糖基化酶的理想诱饵。这种酶和另外两种酶的作用,在涉及基底切除的过程中,DNA骨架断裂和添加富含胸腺嘧啶的序列,产生大量尾巴富含胸腺嘧啶的单链DNA分子。这些分子与富含腺嘌呤的RNA探针杂交产生RNA- dna双链。酶消化RNA部分,释放单磷酸腺苷单体,转化为三磷酸腺苷(ATP)。激活萤火虫荧光素酶所需的能量输入。荧光素酶催化荧光素氧化形成氧化荧光素,并伴有大的生物发光信号。因此,uracil-DNA糖基化酶的检测灵敏度比最先进的荧光和发光法高1-2个数量级。
不像传统的Rube Goldberg机器,以不必要的复杂性为特征,在这个“酶化鲁比戈德堡机器”中,每一步都有一个特定的目的,用来放大最后一步的信号。这被称为“三环级联信号放大”,它使酶的高度敏感检测。
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通过三环级联信号扩增,无标签高通量生物发光检测癌细胞中uracil-DNA糖基化酶
燕,青楠丽Chen-chen李chen yang。
化学。Commun。,2018,54,691-699
DOI:10.1039/C8CC03769H
关于作者
Zoe Hearne是蒙特利尔麦吉尔大学化学博士研究生,新利手机客户端加拿大由李昭君教授指导。她来自堪培拉,澳大利亚,她在那里完成了她的本科学位。她目前的研究集中在过渡金属催化作用,在实验室之外,她是一位热情的化学导师和科学传播者。新利手机客户端新利手机客户端