薯条和小费

Eriko KamataMomoko Maeda金谷康彦，Kae Sato *

化学和生物科学系，新利手机客户端科学院，新利手机客户端日本女子大学，Bunkyo东京112 868日本

*电子邮箱：satouk@fc.jwu.ac.jp

为什么这个有用？

已有许多关于细胞培养用微流控装置的报道，其上下微通道由一层薄薄的PDMS膜分离。在这些设备中，下沟道常干扰上沟道细胞的显微观察。为了避免干扰，研制了一种具有可拆卸下通道的微型器件。

我需要什么？

材料：

PDMS（Silbot 184W/C，道康宁托雷）

己烷

PMMA板（56×76×2 mm）

玻璃载玻片（52×76 mm和26×76 mm）

盖板卡瓦（24×60 mm）

1公斤重

聚四氟乙烯管（1×2 mm和0.46×0.92 mm）

Tygon管（1.59×3.18 mm）

活检穿孔（1 mm和2 mm，KAI公司）

设备：

真空干燥器

烤箱（65摄氏度和100摄氏度）

旋转涂布机

等离子体发生器

真空泵

我该怎么办？

1. PDMS成型

以10:1的质量比混合弹性体和固化剂。在真空下对混合物进行除气，直到没有气泡为止（20分钟）。将脱气后的PDMS混合物倒在母版上，具有上通道（1×1×10 mm）或下通道（0.5×2×15 mm）结构，然后把它放在65摄氏度的烤箱里1小时。从母版上剥下PDMS复制品并将其粘到玻璃载玻片上（26×76 mm）。把它放在100摄氏度的烤箱中1小时（图1）。

2. PDMS薄膜的制备

在PMMA板上以500转/分的速度旋转600微升PDMS预聚物（质量比为10:1），持续20秒，然后以2400转/分的速度旋转600秒。在65摄氏度下烘烤1.5小时。

3. PDMS膜和板与上通道的永久连接

用2-mm活检冲子在上通道两端的入口和出口孔上打孔。将PDMS膜和PDMS板的结合面与上部通道（上部板）暴露在100 W的等离子体中，35 s（图2a和2b）。层压并在65摄氏度下烘烤1小时（图2c）。取下PMMA表，从膜侧用1-mm活组织检查冲头打一个孔，将薄片与下通道连接。

4. PDMS膜和PDMS板与下通道的可拆卸连接

通过使用己烷稀释的PDMS预聚物（稀释比为1:3）作为胶水，将具有下通道（下板）的PDMS板粘合到PDMS膜上。^一（图3A）。在玻璃载玻片（52×76 mm）表面以2000转/分的速度旋转稀释的PDMS预聚物（600μl）30秒，以用薄薄的一层胶水覆盖载玻片，并将其培养10分钟以干燥溶剂（图3b）。将下片放在镀膜玻璃片上（图3c）。在与上薄板粘合的PDMS膜的四个角处涂上胶水（图3d）。从玻璃载玻片上剥下下下片材，将贴有胶水的片材表面放在PDMS膜上（图3e）。培养30分钟后，通过等离子粘合将下片粘合到盖片上。在设备上放置一个1-kg的砝码和一个玻璃片，并在100摄氏度下烘烤1小时（图3f）。

5. 油管

将聚四氟乙烯（PTFE）管（1×2×100 mm）与Tygon管（1.59×3.18×10 mm）连接到上部微通道两端的孔上。将聚四氟乙烯管（46×0.92×150 mm）连接到下部通道的孔上。在管子根部涂上PDMS预聚物，然后在100摄氏度下烘烤1小时，以便牢固连接（图4a和b）。

6. 细胞培养

将细胞悬浮液引入上部微通道，用0.1 mg/ml纤维连接蛋白手工预涂。在37摄氏度下用5%的一氧化碳培养设备。_二16小时，使细胞粘附在上通道底部（PDMS膜表面）。

7. 下片脱落细胞观察

小心地从设备上取下下下薄板（图4c和d）。将装置的其余部分放在盖片上，用倒置显微镜观察（图4 F和H）。

结论

我们开发了一种带有可拆卸下微通道的微流体装置。对于PDMS膜的每一侧，使用不同的粘合技术是很重要的。如果下通道充满空气，并且设备在一氧化碳中孵化_二孵化器，当设备从培养箱中取出时，经常在下通道中观察到露水凝结。下水道中的冷凝使观察变得困难（图4e和g）。这个问题用可拆卸装置解决了。

确认

这项工作得到了日本科学促进会（JSPS）Kakenhi Grant号JP16H04170的部分支持。新利手机客户端

参考文献

1. ChuehB.H.呵呵，DKyrtsosC.R.HoussinT.福泰N.TakayamaS.（2007）。多孔膜与层状微流控阵列系统的无泄漏键合.分析化学新利手机客户端七十九（9）3504—3508。