一种基于溶剂的PMMA微流控器件的制备方法

Harriet Riley开发编辑 — 结婚，2017年11月1日10:44:53+0000

穆斯塔法·阿达米；Abhay Andar；Elizabeth Tan；Govind Rao；Yordan Kostov*

Center for advanced sensor technology，马里兰大学巴尔的摩县，1000个山顶圆，TrC 252，巴尔的摩马里兰州21250.

*email:kostov@umbc.edu.

为什么这个有用？对微流体的需求已稳步增加，部分原因在于护理点设备的日益普及[1]通常，微流控芯片是用热塑性塑料制成的[1]。热塑性塑料是合成聚合物，由于其能够被成型成复杂结构而受到欢迎[3，4].它们通常被用作比玻璃更安全、更便宜的替代品[3，4].然而，正确密封这些装置是一项挑战，尤其是在医学检测领域，对可靠设备的需求很高。例如，压敏粘合剂，普通密封剂，可以限制微流体通道的大小；一些粘合剂会表现出干扰芯片上运行的分析过程的反应性基团[5]。因此，需要一种不受上述限制的密封方法。

这里，提出了一种溶剂法。聚甲基丙烯酸甲酯（PMMA）热塑性塑料，当温度高于其玻璃化转变温度（t_{g_{）时，表现出软化，冷却后恢复到其原始状态。这一转变引入了几个直接结合选项[6]。然而，t_{g_{of pmma is 115°C.即使在这个温度下，粘合所需的压力也相当高。这会导致通道尺寸出现缺陷，当大部分材料软化时。弱溶剂的应用减少了t_{g_{only for the surface of the plastic，从而降低工艺所需的温度和压力。减小的压力降低了通道变形的可能性。此外，由于溶剂引起的软化仅限于表面（前几微米）。较深的河道结构不受影响。因此，直接溶剂粘合法允许无粘合剂粘合，并避免温度引起的变形。作为奖励，这种键的力学性能大大提高了[7]。值得注意的是，这种方法适用于通道深度大于100微米的微流体装置，通常用于由直接激光蚀刻产生的设备。}}}}}}

此技术的另一个优点是，当弱溶剂为乙醇时，它会导致无菌设备的产生。它们可以使用任何实验室中的基本设备快速制造[7]。为了演示这种方法，PMMA与90%乙醇一起用作溶剂，以粘合到其他板材材料，例如：

PMMA sheets，，制造用于样品处理的微流体混合器和其他微流体装置（图1，Ad）[7]；

eptfe膜，制造微流体气泡器（图1，c）；和，

纤维素醋酸酯膜，定制透析设备（图1，b）.

液滴微流体的手工剃须刀图案化磁带原型制作

Harriet Riley开发编辑 — 清华大学，2017年10月19日08:37:56+0000

saifullah lone^{ab^{*i.WCheong^{b^{and s.TThoroddsen^A}}}}

^ADivision of Physical Scien新利手机客户端ces and Engineering，阿卜杜拉国王科技大学，新利手机客户端(KAUST),Thuwal24955-6900，沙特阿拉伯。
^{b^{Institute of Advanced Energy Technology，京浦国立大学，大邱韩国，
电话：+821053165673，办公室：+82-53-950-7590，传真：+82-53-950-6594。电子邮箱：saifullah.lone@gmail.com，inwoocheong@gmail.com，和sigurdur.thoroddsen@kaust.edu.sa}}

为什么它有用？

The subject of droplet microfluidics has grown in importance among researchers in chemistry，液滴微流体的主题在化学研究人员中新利手机客户端越来越重要，物理和生物学，因此，它在药物输送方面得到了应用，封装，单细胞分析，皮克林乳剂和相分离。为了产生单分散液滴，various methods have been employed in constructing microfluidic devices.Emulsions with a coefficient of variation ≤ 5% have been previously reported in T-junction,流动聚焦同轴的，以及其他类型的微流体装置。尺寸小于等于100微米的微滴在工业和生物领域有着诱人的应用。洁净室软光刻技术获得的小通道直径是制造微流体器件的最精确技术。^1，2此技术广泛用于为基于PDMS的设备制作主模具。³然而，关于成本和复杂性，在经济困难的国家和实验室安装洁净室软光刻机是困难的。因此，成本和特殊的洁净室培训限制了其广泛的应用。开发低成本、稳健的技术；喷墨打印，数控加工，xurography或剃刀书写，印刷电路技术，在没有洁净室技术的情况下，已经对印刷和剥离（PAP）微加工和三维印刷进行了测试，以制造微流体装置。通过非洁净室技术在100微米尺寸范围内形成液滴具有挑战性，且易于升级。最近，通过使用激光图案化胶带，已经报道了微流体的快速成型技术^{4->sup>该技术依赖于计算机控制的CO_{2->sub>激光束。这项工作进一步简化了手工剃刀图案化磁带为基础的原型哺乳动物细胞图案化。^{5^{building on this prototping concept，we extended the idea to produce monodisperse droplets under 100 µm size rages by overlapping the razor patterned tape strips (at right angles) on a flat glass surface.在100微米尺寸范围内生产单分散乳剂在制药和化妆品行业有着巨大的用途。因此，我们的方法很可能是制造液滴微流控发生器最简单的方法之一。}}}}

我需要什么？

单面胶带（Temflex 1500 Electrical，厚度150μm）
Flat glass slides，例如显微镜载玻片i>
氧气等离子
Oven or Hot Plate
a microfluidic pdms puncher for drilling holes

deionized water（d.i.水）和20 cSt和10 cSt硅油
图1概述了原型制作过程。原型制作首先将胶带贴在平板玻璃基板上。用锋利的刀片，胶带被切成平行的细条。胶带的厚度（150微米）决定了微通道的深度，但这可以通过将多层胶带相互重叠来增加。接下来，从细带外的区域取出胶带。
to construct a cross junction，一条胶带被提起，并以90_的角度水平放置在另一条上。轻轻按压接头，确保条带连接良好。这些胶带的粘合条用作基于PDMS的复型铸造的母带。
PDMS硅橡胶基和固化剂的混合物（以10:1的比例）在塑料培养皿中浇注在母带的顶部。将混合物在真空下脱气1 h，并在65℃下固化4 hr。然后从主服务器上剪切和剥离固化的PDMS副本。按照上述步骤，可以重复使用主控形状来制作PDMS副本的多个副本。通过PDMS副本钻取入口和出口孔，然后粘合在玻璃基板上，复制品和玻璃都暴露在氧等离子体中后。图1（g）显示了产生单分散油包水（w/o）乳液的PDMS装置。该技术很容易扩展到制造T型接头或双T型接头原型（图1h和i）。
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图1.[strong>（a）Manual Razor Patterned Tape Based Protoming for Droplet Microfluidics（b）Strips of胶带on Flat Glass基板cut by a Sharp Razor Blade and a Ruler，（c）PDMS铸件，将聚二甲基硅氧烷弹性体基料和固化剂的混合物倒入塑料容器中。（d）在固化后切割和剥离复件。（e）最终组装的交叉接头微流体PDMS装置。（f）在光学显微镜下与注射泵相连的微流体装置。（g）显示流动聚焦原型油滴形成中的水的视频帧。面板（h）和（i）显示了剃刀图案的基于胶带的T型接头和双T型接头原型，分别。
图2.（a）image sequence from a video recorded at 10 kfps showing water droplet formation at a cross junction.time between后续帧是200微秒。（b）droplet size a s a function of毛细血管数based on the visocity and flow-连续相速率（20 cSt硅油）对于面板（c）中水平线上方300μm宽的通道和（d）中水平线下方150μm带10 cSt硅油的通道。（c）从视频中提取的图像，showing flow regimes and droplet sizes as a function of flow-rate,通道宽度为300微米，通道深度为150微米。（d）来自150微米宽和深度的小型方形通道的视频帧。 .. .
figure 2（a），演示了我们基于磁带的微流体装置中交叉连接处的液滴形成，通道宽度和深度分别为300微米和150微米。在图2（c）中，我们将水相的流速保持在25μl/min，while systematically increasing the flow-rate of outer continuous oil-phase (20 cSt silicone oil). As the outer flow-rate is increased,发现该状态从低流速下的滴落转变为高流速下的喷射（图2（c））对于最低流速，水相破裂成细长的塞子，在较高的流速下，规则液滴被挤压掉。各种因素影响液滴的大小，但它主要是由连续相中粘性应力之间的竞争决定的，这一竞争主要由以下因素决定的：液滴和界面张力。Here µ is the dynamic viscosity of the outer phase and U is its velocity;while s is the interfacial tension between the water and the oil,对于小型地震道，特征长度比例对于这两种力来说是相同的，因此它从平衡中退出，当当油相流速达到65微升/分钟时，液滴的尺寸达到约100μm，液滴在距交叉点较远的地方破碎。图2（d）显示了通道宽度为150微米、通道深度为150微米的水滴形成。在这种情况下，液滴尺寸达到约73微米，当油相（10 cSt）以25μl/min流动且水相以10μl/min流动时。
Acknowledge:此项工作由阿卜杜拉国王科技大学（Kaust）共同资助，新利手机客户端ThuwalSaudi Arabia,以及贸易部，工业和能源，Korea (Grants No.10067082 and 10070241).

Reference
[1] Qin,d.夏Y.；Whitesides,g=>M特征尺寸大于20μm的复杂结构的快速成型。[谚]马特。1996，8，917-919.
[2]xia，Y.；Whitesides,G.M软光刻。Angew。化学。INT预计起飞时间。1998，37 550-575.
[3]Duffy，d.C<；McDonald，JC<；Schueller，Oj；whitesides，G.M.聚（二甲基硅氧烷）中微流体系统的快速成型。肛门的化学，1998，70，4974–4984.
[4]Luo，L.四、C.嗯，W唐；KC.；L.约巴斯，L.利用激光图案化胶带快速制作微流体系统的原型。微机械Maimon＜/EM＞。2007，17 N107–N111
[5]Anil，B.S.；AliH.；CheulH.C.；拉奎尔P.C.用于哺乳动物细胞图案化的胶带软光刻：伤口愈合分析的应用。生物技术，2012，53 315–318.
.=”ef=“http://www.google.com/buzz/post？url=http%3a%2f%2fwww.xcmww.com%2fchipsandtips%2f2017%2f10%2f19%2fManual Razor Patterned Tape-Based Protoming for Droplet Microfluidics%2f“>..

微流体装置中微生物的快速接种与回收

Harriet Riley开发编辑 — 结婚，2017年10月4日08:36:13+0000

greiner，A.^1,2，TekwaE.W.^1,3，冈萨雷斯A.〈1〉/SUP>Nguyend.⁴
¹Department of Biology，麦吉尔大学1205博士Penfield蒙特利尔，QCH3A 1B1，加拿大。
^{2^{Department of Ecology and Evolution，多伦多大学威尔科克斯街25号，多伦多，在，M5S 3B2，加拿大进化，以及自然资源，罗格斯大学大学农场路14号，New Brunswick,NJ08901，美国。
^{4^{Meakins Christie Laboratories，麦吉尔大学健康中心研究所，以及医学部，麦吉尔大学迪卡里大道1001号，蒙特利尔，QCH4A 3J1，Canada.}}}}

Why is this useful?
Microfluidic devices are used for many different types of experiments across the medical,生态和进化学科（Park等人，2003；Keimer-等人，2008；康奈尔等人，2013；霍尔和德克尔，2014）。例如，用于微生物实验的微流体装置需要接种到模拟自然微生物环境（如多孔土壤）的较小的培养箱中（或等，2007）和生物宿主（Folkesson等人，2012）。这些装置通常涉及复杂的泵装置和不可逆的密封。我们开发了一种只需要普通实验室设备的技术，使设备可重复使用，同时允许微生物不受干扰地生长（基于Tekwa等人，2015；TekWa.等，在Review中。Here,我们为聚二甲基硅氧烷（PDMS）实验装置的组装和先前未记录的无损拆卸提供了详细的指南，以恢复微生物原位然后，可以对其进行相对计数和进一步的种群变化的分子分析。这是每一步视频的补充。
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Figure 1:Microfluidic device containing 14 habitates on an orporate（PDMS）layer pressed to a 60mm x 24mm glass cover slip.栖息地深度为10或20微米，直径从1400微米到2670微米不等，呈环状或网状斑块。该装置用于测试栖息地斑块对微生物动态的影响。栖息地被染成蓝色以便于观察。有关更多信息，请参见Tekwa等人。（2015年）。>
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>>what do i need？
单层PDMS设备with ocitations on one side.
pipette+sterile pipette tips.
sterile petri discases（1/device）
sterile tweezer.
inoculum.
filtered water.
kimwipes.
autoclavable plastic container.
ethanol.
tinfoil.
sterile 1μl invoiceing loop（1/栖息地）.
无菌eppendorfs.
磷酸盐缓冲盐水（PBS）.
biological safety cabinet（BSC）.
how do i do it？
clean the pdms devices：pdms device should be pre-treated once with 0.01n hcl for one hour and plasma treated to keep it hydrosilic and amenable to bonding to glass or plastic substances（cho et al.，2007；TekWa.等，2015）。将1/3的可高压消毒塑料容器装满70%乙醇和PDMS装置，然后用锡纸覆盖。让他们在水槽中静置30分钟以上，然后小心地将乙醇处理掉。向容器中加水10次，然后将其清空，以冲洗设备。最后，用过滤水填充容器，用锡箔和高压灭菌器密封，以便对设备进行消毒。
invocing the devices（perform in a biological safety cabinet，BSC）：将设备在BSC中干燥30分钟。将特征朝上的设备放置在培养皿盖上，并放置少量（即0.7μl）接种到每个（样品装置中14个）上图1）生境。液体的量必须足以填满栖息地，但不能过多地防止PDMS和盖玻璃/培养皿之间的粘合（图2）。使用无菌镊子，拿起设备，面朝下放置在培养皿或盖玻片的中央，用戴手套的手指反复按压背部，将其密封在表面上，使用Kimwipe从侧面吸走多余的液体。Then surround,但不是触摸，将Kimwipes浸泡在过滤水中的装置（图3）确保设备不会在培养箱中变干，在关闭培养皿之前。在培养箱中直立放置所需时间。实验现在可以进行24小时（见补充视频）。
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Figure 2.带有细菌液滴的装置，每个栖息地1滴。>
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Figure 3.“直立”培养皿+Kimwipes+device+coverslip ready to be culted.>
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>recovering from the devices.（perform in a bsc）：open petri dish，小心地取下并丢弃Kimwipes，然后使用无菌镊子轻轻地打开设备并将其面朝上放置在培养皿盖中。12小时左右，栖息地之间的空间将没有PDMS吸收的液体，防止微生物在拆卸过程中混入气室。已经干涸的栖息地将呈现白色（图4）不能使用。用PBS将无菌接种环浸入eppendorf中，然后用这个环刮一个栖息地（图5）再次将接种环浸入eppendorf培养基中，然后将其培养过夜以进行进一步的分析，例如电镀以进行相对细胞计数（如果有不同菌株）和其他分子分析。对你感兴趣的其他栖息地重复上述步骤，使用新的接种环。PDMS设备现在可以像步骤1中一样进行清洁并再次使用。
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Figure 4.接种和孵化装置的视图，从培养皿底部看。>
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Figure 5.从分解后的PDMS设备中的栖息地中回收细菌。>
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>>what else should i know？
The recovery technology can be used to estimate relative proportions of different types of microbes（e.g.变形频率）这在进行竞争分析和进化实验时很有用。与Tekwa等人不同。（2015）这项技术放弃了共聚焦显微镜的使用；相反，通过直接微生物恢复和标准电镀程序来评估设备的内容。
links to videos.
these videos go through the specific procedure that we used to perform experimentals on competition and cooperation inpseudomonas aeruginosa.and may be有助于确定介质的具体数量，生长时间，等。这可用于使用类似PDMS微流体设备的实验。
第1部分–intro+washing the deviceshttps://youtu.be/bne3zn3wu4q >
第2部分–invocing the devices https://youtu.be/p-uyireyrym >
第3部分–recovering from the devicees https://youtu.be/ylnmgxqmyge >
supplementary–fluorphy bacters experiment https://youtu.be/lgmtrys62pa >
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>>acknowledgements>
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agr was supported by an nserc subgraduary student research award and by an nserc发现补助金。EWT得到了自然与科学基金会和生物多样性科学中心的支持。新利手机客户端加拿大研究主席计划和NSERC发现拨款支持了AGO。DN得到了CFI领导人机会基金（25636）的支持，A Burroughs Wellcome Fund Cams Award（1006827.01）and A CIHR Salary Award.
References.
Cho，H.J·诺森，H.坎贝尔K.,MelkeP.威廉姆斯JW.JedynakB.,…列夫钦科，a.（2007）。高密度菌落的自我组织：有效的群体控制。PLOS生物康奈尔，JL.,Ritschdorffe.T.WhiteleyM.剪切JB.（2013）。显微细菌群落的三维打印。美国国家科学院院院刊新利手机客户端110（46），18380-18385.
Folkesson，A.JelsbakL.,杨L.,约翰森H.K.,CiofuO.哈比，N.莫林，S.（2012）。铜绿假单胞菌对囊性纤维化气道的适应：一个进化的观点。自然评论。Microbiology,10（12），841、
< P>f.J.德克尔C.（2014）。放大看看更大的画面：研究细菌的微流体和纳米制造工具。新利手机客户端科学，346（6208），1251821.
keymer，Je.加拉贾达P.LambertG.LiaoD奥斯丁R.H.（2008）。通过竞争细菌计算相互适应度。美国国家科学院院院刊新利手机客户端105（51），20269-20273.
或，D斯密茨B.F.幽灵，JM.Dechesne,A.弗里德曼S.P.（2007）。不饱和多孔介质中影响细菌生境和活动的物理约束——综述。水资源进展30（6），1505-1527.
公园，S.沃拉宁P.M.Yuzbashyane.A.SilberzanP.股票，JB.,奥斯丁R.H.（2003）。构成法定人数的动议。新利手机客户端科学，301（5630），188-188.
tekwa，e.W.NguyenD容克DLoreauM.冈萨雷斯a.(2015)。微生境芯片中的斑片状结构影响细菌合作的进化动态。芯片上的实验室15（18），3723-3729.
tekwa，E.W.NguyenDLoreauM.冈萨雷斯a.缺陷菌群与病原菌的合作有关。在评论中。
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快速简便的玻璃培养皿制作，用于长期活细胞成像

RSC互联网服务 — 星期二，2017年7月25日13:00:04+0000

Ayako Yamada^{123^{，Jean-Louis Viovy^{123^{，Catherine Villard^{123^{and st_phanie Descroix¹²³}}}}}}
¹Laboratoire Physico Chimie居里，Institut Curie,PSL研究大学，CNRS UMR168，巴黎,法国。
²Sorbonne Universit_s，UMPC大学Paris 06,巴黎,法国巴黎,法国
email:ayako.yamada@curie.fr
why is this used？
Glass is a variable surface for chemical treatments，玻璃是用于化学处理的多功能表面，它仍然是迄今为止最常用的表面工程基板（例如微关注，PDMS微流体装新利手机客户端置的表面化学）或等离子键合。在这种基质上进行细胞培养，玻璃底培养皿是为了保持细胞外明确的培养基体积，and to protect the cells from contamination and medium evaporation.此外，它们在光学上比通常用于细胞培养的聚苯乙烯培养皿更适合显微镜观察。尽管市场上有玻璃底培养皿（例如来自WPI的荧光皿）塑料墙的存在限制了可以在玻璃底面上进行的处理，而那些处理更昂贵（每盘5欧元；φ50 mm）比聚苯乙烯盘子（例如来自TPP的φ40 mm盘，每盘0.5欧元）。In this Tip,我们描述了一种比之前的提示更简单的方法，将聚苯乙烯培养皿转化为玻璃底培养皿，同时保留了在玻璃装配成盘子之前对其进行任何处理的可能性。注意，在这种方法中，培养皿的主体将被倒置，因此盖子不再被盖子塞子提升到盘子开口的上方。然而，通过身体和盖子之间的缝隙进行的气体交换似乎足以在这道菜中健康地培养细胞。综上所述，本发明提供了一种在微流体装置中或直接在培养皿中的工程表面上进行细胞培养的低成本快速解决方案。适合于长期的活细胞成像。
What do I need？
φ40 mm聚苯乙烯组织培养皿（e.g.tpp 93040）
φ40 mm cover slide（e.g.Thermo Fisher Scientific #11757065,0.2_€per slide）.
large screw driver（or a similar tool）.
uncurred mixture of pdms base and固化剂（10:1 w/w）.
oven or hotplate.
铁磁金属板（e.g.PDMS容器盖，可选）
圆柱形磁铁（可选）
what do i do？
place a polyses culture dish upside down on a surface and hit a times the center of the dish bottom with the grip of a large screw driver（Fig.1a）直到盘底脱离盘壁（图1b）。成功率在9%到10%之间时，底部应该容易下降。避免用力敲打底部而破坏盘壁。
将未固化的PDMS混合物摊铺在平坦的基板上（例如一个较大的塑料培养皿），并在培养皿边缘（破碎部分）涂上PDMS（图1c）.
place the dish（breaked part up）on a cover glass slide（Fig.1d）在烤箱或加热板上固化PDMS。在80°C下保持10分钟（图1e）.
Surface treatment（e.g.微接触印刷）或PDMS芯片与玻璃表面的等离子粘合可以在碟片组装之后或之前进行（图1f）.
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to keep humidity for on-chip cell culture，the dish can be filled with e.g.磷酸盐缓冲盐水（图2a）。装有细胞的芯片或微型电池的盘子可以放置在CO_{2_2b）.}
long term live cell imaging can be performed using a stage top funcator（fig.2c）.
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>what else should i know？
depending on the support type of microscopes，可能需要很好地对齐盘子和玻璃片的轮廓。这可以使用圆柱形磁铁（每盘3个）和铁磁金属板（图3a）在烤箱或加热板上进行PDMS固化时（图3b）.
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Acknowledgement.
this work is supported by the French National Research Agency（ANR）as part of the“investissements d'avenir”program（reference:anr 10-nano 0207）and erc advanced grant cello（fp7-ideas-erc-321107）.
reference.
[1]卡巴列罗D，Samitier J为活体细胞成像研究制造细胞培养室的不同策略。薯条和小费，2014年12月2日url=http%3a%2f%2fwww.xcmww.com%2fchipsandtips%2f2017%2f07%2f25%2f制造用于长期活细胞成像的玻璃底部培养皿%2f&title=rapid+and+easy+manufacturing+of+glass bottom+culture+disks+for+long-term+live+cell+imaging“>；.=>..

手动光罩对准多层光刻

RSC互联网服务 — 周一，2017年6月5日14:44:50+0000

Frank Benesch Lee先生，若泽MLazaro GuevaraDirk R.阿尔布雷希特，伍斯特理工学院，WorcesterMA 01609 USA
为什么它有用？
Modern Microfluidic Devices can incorporate channels of different heights to implement their designed function.示例包括水动力聚焦[1]，细胞陷阱[ 2 ]，以及隔离细胞成分的腔体[3]。这些器件是由多层SU-8光刻胶母模制成的。每层高度需要一组单独的光刻步骤，包括光刻胶旋转，光罩对准，exposure,烘焙，最后是一个开发步骤，以显示3D抗蚀剂图案。
Mask Aligners have microscopes and stage微米for precision，每层光罩的微米级校准，在基板晶圆上有可见的标记。它们是制作精确对准的多层图案必不可少的工具，但是在许多研究性大学的洁净室里，相比之下，他们的巨额开支可能使他们无法接触到教学机构和个别实验室。使用便宜的紫外线光源可以制备单层微流体。甚至是自制的。原则上，可以在显微镜下进行手动光罩校准，然后带到紫外线源，然而，这带来了一些复杂的情况。第一，使用便宜的显微镜或立体镜很难看到对准特征。especially in thin SU8 layers,due to poor contrast between exposed and unexposed regions before development.第二，在移动到曝光系统的过程中可能会发生错位。
这里，我们介绍了一种手动光罩定位方法，其精度为50微米，没有面罩校准器的帮助。
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What do I need？
Equipment and Supplies for photography:Spin Coater，和紫外线曝光系统USB）或立体显微镜 photomask transparences for each layer. scotch tape. fine tip permanent marker. Straight Razor Blade. Cutting Mat. 4 small（3/4”）or mini（1/2”）binder clips. glass plate，大约。4×5“，与曝光系统兼容>>
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cut the photomasks from the transparency sheet，留下4个角标签。在显微镜下将两个掩模相对对齐（图1a），并用活页夹将它们夹在一起。确保正确的蒙版方向，并检查蒙版上多个对准标记的对准精度。（请注意，使用立体显微镜的水平对准精度较低，because each eye's optical path is angled 5 – 8 degrees,而垂直对齐不受影响。首先沿垂直方向对齐，然后将遮罩旋转90度，以确保在水平和垂直方向都准确对齐。）向每个角添加活页夹（图1b）。并确认对准。下一步，一次取下一个活页夹，用直的刀片在每个卡舌上切一个锋利的V形缺口，通过两个面具。将刀片垂直向下压，以避免移动对中。更换活页夹，然后继续下一个拐角，直到所有4个切口都被切割（图1c）。
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spin the first layer of su-8 onto the wafer to the desired thickness and prebake.在晶圆底部贴上4片透明胶带，使粘边朝上（图2a）。把第一个掩模放在晶片上，轻轻按压以将其粘到胶带卡舌上。使用细尖标记将对准缺口（图2b）追踪到透明胶带（图2c）上。转移到紫外线曝光系统并曝光。小心地移除掩模，而不将透明胶带从晶圆上拆下并烘烤后。透明胶带与95°C烘烤兼容。使用另一条胶带覆盖胶带Tabs保护标记不受污染，并允许下一个蒙版的平滑对齐。
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spin coat the next photoresist layer and prebake（Figure 3a）.用一圈透明胶带将晶圆贴在玻璃板上，使其保持原位。将第二个掩模放置在晶圆上，确保对齐“V”标记在每个对齐槽口内居中，并穿过所有4个角（图3b）。用薄（2-3 mm宽）胶带将面罩粘到玻璃板上，并根据需要调整对齐。小心地将玻璃板与晶圆和对齐的光罩一起转移以进行曝光（图3c）。
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repeat step 3 for any additional layers.取下胶带凸耳并显影光刻胶。在显微镜下评估校准精度（图4）。

Conclusions:
In this tip,我们提出了一种手动校准多个透明光罩的方法。我们实现了<100微米和50微米的可重复精度（图4a）。这些精度在许多多层设计的要求公差范围内（图4b）。在许多情况下，较小的设计备选方案可以放宽对准公差，例如，在一个圈闭设计中，包含一个薄的水平通道，允许流体绕过，但捕获较大的物体（图4c）。在这个例子中，100μm宽的旁路通道仅部分覆盖陷阱缺口，然而，将旁路通道扩大到400μm，尽管有轻微的偏差，但仍能实现功能性设备。总体而言，这种简单的方法可以制造含有多层高度的微流体装置模具，没有昂贵的面具校准设备，精度至少为50μm。此外，切割对准标记后，在光刻过程中根本不需要显微镜，加速制造多个主控形状。
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Acknowledgments:
Funding provided by nsf igert dge 1144804（fbl），富布赖特·拉斯帕（JMLG）危地马拉圣卡洛斯大学（JMLG）NSF CBET 1605679（DRA）国家卫生研究院R01DC16058（DRA）和Burroughs Wellcome-Casi（DRA）。Acknowledgments:
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References:
chih-chang，C.H.支雄Y.Ruey Jen二维聚二甲基硅氧烷（PDMS）微通道中的三维水动力聚焦研究。Journal of Micromechanics and Microengineering，2007。17（8）：p.1479.
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一个简单的，无泡细胞加载技术在芯片实验装置上培养哺乳动物细胞

RSC互联网服务 — 星期二，2017年2月28日16:02:25+0000

sahl sadeghi^{1…**sup>and meltem elitas¹}
¹faculty of engineering and natural science新利手机客户端s，萨班奇大学34956，伊斯坦布尔土耳其
^{*^{sahl sadeghi written the paper}}
purpose
lab-on-a-chip（loc）devices significantly contribute different sciences of science.新利手机客户端聚二甲基硅氧烷（PDMS）是主要材料之一。广泛用于制造生物基因座，由于其生物相容性和易用性。然而，PDMS和其他一些聚合物材料本质上是防水材料（或疏水材料）。这导致装载和操作机车困难。在生物系统中，疏水性的显著后果是微流体通道中的气泡被截留。虽然PDMS的氧等离子体处理在一定时间内降低了表面疏水性，pdms的亲水性随着时间的推移而消失¹。微流体中气泡的持续问题导致了为克服它而进行的几项研究。其中一些解决方案建议实施气泡捕集器 ² ^，³ ，通过亲水涂层对locs进行表面处理并且使用主动控制的气泡去除系统 ⁵ ^，⁶ ，虽然前面提到的设计复杂性被引入locs in order to reduce the blockling problem caused by the bubbles，这些修改也会导致更高的生产成本，复杂的操作，设备准备时间长。在许多单细胞实验中，没有丢失或损坏稀有细胞，这些细胞需要被导入LOC。Here,我们提供了一种简单方法，该方法能够在不引入微流体通道中气泡的情况下加载少量的细胞，而不引入微流体通道中的气泡。
<强>材料><强>
<表>
·；PDMS>160（二）吸液管尖端
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（道康宁西尔加德184硅弹性体工具包） >
（20-200 ul，埃彭多夫# 3120000917)
· Pipetman (Gilson,P200#69989-5） >
···························································新利手机客户端··················泛生物技术#p04-01548） >
················································atcc-htb-22） >
·················································鲁尔洛克小费，#300912） >
···············································100 UL SIR，#84884）
procedure.
step 1:insert two 200 ul pipet tips at the inlet and outlet ports of the pdms device as illustrated infigure 1.
step 2:instroduct a 70%aqueous ethanol into the inlet pipet tip using a pipetman.因此，微流体通道的内表面将被消毒，并且流体流量将在微通道内进行测试，因为它在许多其他locs协议中被应用^7.^，溶液流过PDMS装置的微通道和微腔。注意避免从出口管端施加负压，可能通过管道连接造成空气泄漏。此外，根据亨利定律，施加负压将直接影响溶解在液体中的气体量，这可能有助于在微通道内形成更多气泡。正压有助于通过溶解气泡去除气泡。
步骤4:在用乙醇溶液冲洗芯片之后，检查芯片以确保去除气泡。如果有气泡，重复步骤2和3。
step 5:fill the injector（10 ml）with medium or phosphate buffered saline（pbs）.注意清除注射器内的气泡，安装并锁定注射器上的针头。然后，将介质流过针，确保针中充满介质，没有任何气泡。将针插入进液管尖端；轻轻地施加正压，用介质代替乙醇。下一步，collect the excess medium from the outlet-pipet tip.
Step 6: Fill the inlet pipet with fresh medium in such a way that due to certain height (h) between the levels of the medium in the inlet and outlet pipet tips,微通道内将建立非常慢的介质流。
步骤7:将您的细胞加载到Hamilton注射器中，并小心确保其针和注射器内没有气泡。如步骤5所述，将汉密尔顿注射器的针头插入进液管尖端，图1。通过向注射器施加温和的正压来引入细胞。PDMS芯片中建立的流将把释放的单元传送到芯片中所需的位置。流量可通过调节施加的正压力和进出口管尖收集的介质量来调节。可以收集出口管端多余的上清液，在实验期间，新鲜介质可以通过入口管端供应。
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Henry,W.Phil。反式R.SOC。朗德1803。93: 29–274.
Figure 1–Schematic of cell loading procedure in a microfluidic pdms device.
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A novel low cost method to prepare a cross-linked gelatin membrane for potential biological applications

RSC互联网服务 — 结婚，2017年2月1日12:40:37+0000

Gabriele Pitingolo^{1^{and Valerie Taly^{1^>}}}
>^{>^{>^{>^{1^{inserm umrs1147，CNRS SNC 5014，巴黎笛卡尔大学，2016年法国国家癌症控制设备。巴黎,法国。}}}}}
电子邮件：gabriele.pitingolo@parisdescartes.fr.
why is this useful？在最近几年中，几种明胶类型（即GelMAa或b）因其良好的生物相容性而被用于药物制剂和组织工程，低成本下细胞分化和可用性的倾向。^{1^{使用明胶作为生物材料也有利于调整基质的机械性能，改变水的浓度和交联度。然而，Transwell是最常用的具有微孔膜的渗透性支持物，是培养细胞的标准方法。^{2^{This commercial type of support has been generally used to study the molecular secretation by different cell types and also to reprodute severalin virtualphysical barriers（i.e.血脑屏障）。^{3^{transwell^{？^{cell culture inserts are simply，因为它们是无菌的，易于使用，但是它们非常昂贵（每12包大约300美元），而且由于它们是由聚酯或聚碳酸酯制成，因此生物材料的性能范围有限。此外，正如法兰加和他的同事所展示的，这些多孔膜通常集成到微流控芯片上进行渗透性研究。⁴}}}}}}}}
recently，勇XChen et al.提出了一种制备细胞培养用悬浮水凝胶膜平台的替代方法，designing a complicated protocol to synthesize the GelMA and to fabricate an open-grid structure made of polylactic acid (PLA) polymer using a commercial printer.⁵ Our tip shows a novel low-cost method for preparing a cross-liked gelatin membrane as a permeable support useful for potential biological applications.此外，提议的方案不需要使用复杂的制造技术或昂贵的材料。它使用来自猪皮肤的明胶和甲醛蒸气技术交联明胶膜。作为概念证明，我们将明胶膜集成到微流控芯片中，为了展示在静态和动态条件下开发可比较研究平台的可能性。
此外，为了证明制备的明胶膜对培养温度（约37°C）的抗性，we tested the mechanical properties (Young's modulus) before and after the incubation time (2 days).最后，我们观察到了使膜可用于细胞培养研究的机械性能和结构完整性的保存。
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What do I need？
transwell insert
porcine agreement type a
甲醛溶液
手术刀
pmma milled chamber or similar
what do i do？从Transwell中取出多孔膜或者使用类似的自制支架。为了方便这一步，可以方便地使用解剖刀沿整个直径切割薄膜。.
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after the removal of the film，Transwell®支持随时可用。将结构放置在PMMA室的中心（深度至少为2 mm）（图2a），并倒入10%w/v明胶，没有气泡，进入PMMA室，在Transwell^{>内（图2b）。稳定2分钟后，把系统放在冰箱里，至少10分钟。}
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after the gelation time（10 minutes at 4°C）it is possible to remove the formed agree film from the PMMA chamber，借助手术刀帮助分离（图3a-3b）。如图3c所示，明胶膜看起来非常平坦，细胞培养的理想特性（图3c）。为了保证细胞培养过程中机械性能的保持，使用经典方案“细胞生物相容性”交叉连接明胶膜，such as glyceraldehyde⁶,甲醛^{7^{和戊二醛^{8^{methods or natural products such as genipin.⁹}}}}

In this case,采用气相甲醛法将制备的明胶膜交联，得到水溶性较低的体系。更高的机械强度和抗酶降解的稳定性。我们将明胶膜暴露在甲醛蒸气中1天。在图4a中，我们显示了差异，after 48 h of culture conditions,在样本交叉链接（左）和非（右）之间。The final depth of the cross-linked gelatin membrane is around 1 mm,然而，可以改变深度，调整液体明胶量。最后，我们计算，潜伏期前后，交联明胶膜的杨氏模量，观察40千帕的类似值（使用液压测试系统instron dx进行压缩测试）。
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integration of the agreement film into a microchip.在本节中，we detail the integration of the gelatin membrane into a microfluidic chip.例如，我们使用了之前工作中提出的相同几何体制作渗透性实验装置（图5a）。如图5b所示，just pour the liquid gelatin into the smaller drilled microchannel,用移液管形成一层均匀的薄层明胶（图5C）。在4°C下胶凝后，使用上述方法将形成的明胶膜交联，结果如图5d所示。为了将不同的PMMA-PDMS基板结合起来，我们在此提出了一种最近由我们的小组开发的磁性方法。在溶剂蒸发和等离子结合的情况下，通过物理化学应力来保护明胶膜。图5e显示了最终的芯片。
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conclusions:in this tip，采用一种简单、低成本的制备方法制备了一种新型生物相容性明胶渗透载体。Vapor formaldehyde method or other chemical crosslinking approach can be applied to crosslink the integrated gelatin membrane for the use as potential scaffolds for cell culture.此外，通过改变明胶的初始浓度，可以调节渗透膜的杨氏模量和厚度。the degree of cross linking and the amount of liquid gelatin.最后，我们展示了明胶膜与模块化微芯片的集成。因此，我们提出了一种简单而低成本的方法来制备细胞生物学和其他应用的渗透明胶膜。
acknowledgements
this work was carried out with the support of the pierre gilles de gennes institute equipment（“investissements d'avenir”program，参考：ANR 10-nano 0207）.
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references.
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一个简单的，无泡细胞加载技术在芯片实验装置上培养哺乳动物细胞

A novel low cost method to prepare a cross-linked gelatin membrane for potential biological applications

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		图1.[strong>（a）Manual Razor Patterned Tape Based Protoming for Droplet Microfluidics（b）Strips of胶带on Flat Glass基板cut by a Sharp Razor Blade and a Ruler，（c）PDMS铸件，将聚二甲基硅氧烷弹性体基料和固化剂的混合物倒入塑料容器中。（d）在固化后切割和剥离复件。（e）最终组装的交叉接头微流体PDMS装置。（f）在光学显微镜下与注射泵相连的微流体装置。（g）显示流动聚焦原型油滴形成中的水的视频帧。面板（h）和（i）显示了剃刀图案的基于胶带的T型接头和双T型接头原型，分别。
图2.（a）image sequence from a video recorded at 10 kfps showing water droplet formation at a cross junction.time between后续帧是200微秒。（b）droplet size a s a function of毛细血管数based on the visocity and flow-连续相速率（20 cSt硅油）对于面板（c）中水平线上方300μm宽的通道和（d）中水平线下方150μm带10 cSt硅油的通道。（c）从视频中提取的图像，showing flow regimes and droplet sizes as a function of flow-rate,通道宽度为300微米，通道深度为150微米。（d）来自150微米宽和深度的小型方形通道的视频帧。		..	.

（道康宁西尔加德184硅弹性体工具包）		>
（20-200 ul，埃彭多夫# 3120000917)
· Pipetman	(Gilson,P200#69989-5）	>
···························································新利手机客户端··················泛生物技术#p04-01548）	>
················································atcc-htb-22）	>
·················································鲁尔洛克小费，#300912）	>
···············································100 UL SIR，#84884）